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SYBR Green Premix Pro Taq HS qPCR Kit
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  • 货号 AG11701
  • 品牌 AG/艾科瑞
  • CAS号 见包装
  • 规格/包装 500 rxns
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  • 储存条件 见包装
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制品说明

本制品是采用SYBR® Green嵌合荧光法进行qPCR的专用试剂,是一种2X Premix试剂,反应液配制十分简单。本制品中SYBR® Green浓度、PCR反应体系都进行了优化,采用了反应性能优越的 Pro Taq HS体系(混合了Taq抗体),能够有效抑制非特异性扩增,提高PCR扩增效率,可以进行高灵敏度的Real Time PCR反应,可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,从而对靶基因进行准确定量、检测。

使用注意事项

1. 本制品预先混有SYBR® Green,浓度为2X 的Premix,PCR反应液配制时,只需加入模板、引物、灭菌水便可进行Real Time PCR反应,操作简单方便。

2. 本制品中使用的是本公司改良后的DNA聚合酶,配合独自开发的buffer,可以进行Hot Start法PCR反应,并具有高扩增效率,高扩增灵敏度之特点。

3. 使用前,请上下轻轻颠倒混匀( 请勿涡旋振荡混匀),避免产生气泡,防止因混合不均匀造成的反应效果不佳。

4. 配制反应液时,试剂请于冰上放置。

5. 本制品中含有荧光染料SYBR® Green,配制PCR反应液时应避免强光照射。
6. 反应液的配制、分装请一定使用新的 (无污染的) 枪头、Microtube等,尽量避免污染。


产品原理及实验案例

产品原理:

1) PCR 扩增原理:PCR 是一种 DNA 体外扩增技术,是在模板 DNA、引物和脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于 DNA 聚合酶的酶聚合反应,将待扩增的 DNA 片段经过“高温变性-低温退火-引物延伸”三步反应的多次循环,使得 DNA 片段在数量上呈指数增加,在短时间内获得大量目的基因片段。
扩增详情如下:一般将步骤①②③称为一个循环,每次进行 DNA 扩增时以此循环 30-40 次。
步骤①:DNA 进行高温变性,DNA 双螺旋结构解链;
步骤②:引物与单链 DNA 进行退火;
步骤③:引物在 DNA 聚合酶的存在下进行延伸,与单链 DNA 形成互补链;



2) SYBR®Green I 嵌合荧光法利用荧光染料与双链 DNA 结合后发出荧光的原理,首先将荧光染料加入 PCR 反应液中,在 PCR 扩增的延伸过程中,荧光染料会嵌入到 DNA 双链并发出荧光。此时可以通过检查反应液的荧光信号值,从而达到对目的基因进行定量分析的目的。


实验案例:

1. 通过荧光定量 RT-PCR 方法检测小鼠 GAPDH Gene。RNA 起始量 2pg~2μg。Real-Time PCR 扩增曲线、融解曲线、标准曲线如下图:




2. 通过荧光定量 RT-PCR 方法检测人 H32F Gene (TFRC)。RNA 起始量 20pg~2μg。Real-Time PCR 扩增曲线、融解曲线、标准曲线如下图:



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